肉的宰后嫩化主要的归因于肌原玻纤框架的毁损，肌原玻纤框架是由内源性淀粉酶电离酶分解塑料肌原玻纤和肿瘤肿瘤人体细胞核核骨架淀粉酶会导致的。与十多年来经常是点赞焦聚的钙淀粉酶酶不一样的，胱天淀粉酶酶（caspases）近已成为感需求来看题。胱天淀粉酶酶在肿瘤肿瘤人体细胞核核凋亡的执行工作过程起着至关必要的功效，但其中caspase-3在去世淀粉酶电离中的功效是双方向和更复杂的，因为有必要进第一步学习。S-亚硝基化在调接器钙放、能量转换新陈代谢、淀粉酶质分解塑料和肿瘤肿瘤人体细胞核核凋亡来调接器肉质地，包涵嫩度和持水特性。现已学习出现 S-亚硝基化能够 下降依懒线粒体的caspase-3级联的反应，这几率是胸肌肿瘤肿瘤人体细胞核核凋亡和牛肉片品行发生变化的原因。caspase-3的学习着重是其与肿瘤肿瘤人体细胞核核凋亡的密切关系，只不过，太少有学习浅析S-亚硝基化调接器caspase-3的机制化。

2024年9月由东莞林业综合大学张万刚专家开发团队在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱动物为该研究提供了亚硝基化体现组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

中文名字题目：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

杂志期刊：Journal of Agricultural and Food Chemistry

202历经四年后果因素：5.7

刊登准确时间：2024年9月

的客户基层单位：南京农业大学

研究分析素材：蛋白

拜谱展示 高技术：亚硝基化修饰组学

技木行车路线：

一、研究探讨结局

01.Caspase-3特异性

现阶段尚不看清楚NO对caspase-3的促使目的是否能够归因于NO介导的S-亚硝基化，各种不同浓硫酸浓度均值的GSNO用于外源性NO产生，以诱导型caspase-3的体内S-亚硝基化。效果认为，与是没有GSNO的组比较，100、200和400μM GSNO组的caspase-3催化活性酶类取得调低（图1），与事先新闻报导同样。GSNO操作调低caspase-3催化活性酶类的风险情况仍欠缺揭示。

图1 多种酸度的GSNO进行处理对caspase-3抗逆性的印象

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化层度

思考方案Caspase-3的亚硝基化层次，以呈现GSNO对Caspase-3的生理反应性。经GSNO净化处理后，在线论文检测到caspase-3血清S-亚硝基化难度不断增加（图2）。这結果呈现，外源性GSNO致力于可成功的英文引导caspase-3的身体之外S-亚硝基化。真让人吃惊的是，在无GSNO产生的相较比较组中在线论文检测到的忽闪的S-亚硝基化带，这呈现caspase-3有机会突发内源性的S-亚硝基化。不仅如此，本思考方案中caspase-3的S-亚硝基化层次较高，而caspase-3的活力性缩减，这与以往的思考方案不符。或许，caspase-3的特男人S-亚硝基化装饰位点尚不知道，还必须要进步骤的思考。

图2 GSNO操作对caspase-3S-亚硝基化水准的反应

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化表达组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的队列。绿色标示的队列说法S-亚硝基化肽，朱红色标示的C说法S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱仪

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3光降解结淀粉酶

结血清为一个首要的受损肿瘤细胞骨架血清，在维系肌受损肿瘤细胞构成的构成详尽篇性和弯曲性几个方面起着首要功用，科学研究S-亚硝基化caspase-3对结血清吸附的敏锐性包括首要功用。与Std（未用胱天血清酶-3和GSNO孵育的默认肌钎维板血清）组对比，0 μM GSNO组（肌原钎维板和caspase-3的孵育，无GSNO）的详尽篇结血清分子量的更为分明降低，提醒caspase-3对结血清包括不确定的血清溶解功能。在GSNO孵育后，详尽篇结血清的分子量的分明提升（P < 0.05）。不仅，当GSNO溶液浓度提升时，详尽篇结血清的分子量的延续调涨（P < 0.05）（图5）。某些出现 表面，SNO掩盖的caspase-3以水平面信任的措施能够抑制结血清的吸附。

图5.S-亚硝基化caspase-3降解塑料结血清

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3光降解肌钙球蛋白-T

肌钙核核蛋清质酶-T (TnT)是原肌球核核蛋清质酶调准主管力量收敛的细条的必须肌原仟维核核蛋清质酶。TnT的光可挥发共同点是检则到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化前提条件下，caspase-3对TnT的光可挥发问题图甲6如下图所示，与Std组（包含caspase-3和GSNO的肌原仟维）较之，caspase-3组中30 kDa TnT场面描写相关系数加大，表示caspase-3组织了TnT的光可挥发，另外，caspase-3与GSNO的孵育形成30 kDa TnT增涨。在100和200 μM GSNO组期间是没有检则到分明的一定的差异(P > 0.05)，而当GSNO的溶液浓度到400 μM 时，该场面描写相关系数能够抑制(P < 0.05)。这样的遇到表示了SNO表达的caspase-3对TnT光可挥发的能够抑制成用。结核核蛋清质酶和TnT是caspase-3的刺激性底物，而GSNO除理降底caspase-3的生物也许 形成肌原仟维核核蛋清质酶光可挥发地步降底。与此同时综合上面的分析我们行看出，NO引诱的S-亚硝基化行借助表达半胱氨酸残基来调准caspase-3的生物，借以进几步危害到其对结核核蛋清质酶和TnT的核核蛋清质酶电离水平，以此危害到鸡肉口感。

图6. S-亚硝基化caspase- 3溶解肌钙淀粉酶-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、总结

本实验目的在于研讨S-亚硝基化对caspase-3突显的决定十分马上又对牛羊肉片肌原玻纤体内分解的决定。蛋清质质S-亚硝基化都可以突显caspase-3的半胱氨酸残基，以此引发caspase-3抗逆性减少，进每一步促使了其对牛羊肉片肌原玻纤蛋清质质的蛋清质质淀粉水解效率。

三、拜谱工作小结

科研采取了酶活判断法，亚硝基化体现组学探讨，WB等判断方法，看到血清S-亚硝基化能够体现caspase-3的半胱氨酸残基，这导致了caspase-3活性氧的有效降低，齐头并进步骤抑止了其对牛肉片肌原化学纤维血清的血清溶解程度。本科研为解释清楚血清质亚硝基化对肉肥的改善逻辑保证了个新的焦距。

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可以参考资料：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663